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描写的姊妹花是一对孪生姊妹（胡蝶兼饰）的不同遭遇。妹妹二宝自幼跟随私贩洋枪的姊妹花父亲逃往城市，长大以后被父亲送给了军阀钱督办做姨太太；姐姐大宝则和母亲（宣景琳饰）一起住在乡下，姊妹花公车被弄到高潮岳的扮演者后来嫁给一个穷苦的姊妹花木匠桃哥（郑小秋饰），父母姊妹不通音讯，姊妹花彼此不知下落。姊妹花十多年后，姊妹花大宝夫妇和母亲从乡下流落到城市。姊妹花桃哥去做工，姊妹花大宝抛下未满月的姊妹花孩子，到钱督办的姊妹花公车被弄到高潮岳的扮演者公馆去当奶妈，她带的姊妹花正好是二宝的孩子。二宝作为主妇，姊妹花对大宝非常冷淡，姊妹花甚至因为大宝外貌酷似自己而感到反感；大宝为了保住饭碗，姊妹花只好尽心服侍小主人。一天，桃哥干活时摔伤，无钱医治，大宝便恳求二宝预支一点工钱，但二宝非但不肯，反而打了大宝一记耳光。大宝为了救治丈夫，便窃取了小主人的金锁片，不巧又被钱督办的妹妹撞见，大宝失手碰倒花瓶，致使钱妹遭误伤而亡，大宝即以杀人罪入狱。大宝入狱后，母亲前来探监，才发现主办大宝一案的军法处长正是遗弃自己多年的丈夫。丈夫在妻子的愤怒斥责和要求下，安排妻子和大宝、二宝会面。真相大白后，二宝终于为母亲和姐姐的苦难遭遇所感动，不顾父亲劝阻，带领她们驱车前往钱督办处求情。 1934年，《姊妹花》被评选为最佳有声片；1935年，《姊妹花》曾和《渔光曲》等影片一起被推荐参加莫斯科电影节展映。